Welcome to Heagreen !!! 400-100-0012

中文

知识中心
具有可持续发展和智慧创新能力的卓越企业
低聚木糖和多酚类物质的结合影响远端结肠的微生物组成和活性,对人体细胞产生免疫调节作用
发布时间 : 2022.06.24
低聚木糖 多酚 益生元 人类肠道微生物生态系统模拟器 阿克曼菌


试验设计

试验样品:Plexus Worldwide(Scottsdale,USA)提供了Slim,以每天1594 mg的剂量进行测试,其中包含1000 mg的益生元XOS和531 mg的多酚混合物,其中包含500 mg的绿咖啡提取物(至少含50%的羟基柠檬酸),藤黄果提取物20毫克(含50%柠檬酸),α-硫辛酸10毫克和桑葚果实提取物1毫克。

实验设计:

1)短期结肠培养:以5位不同健康人类的粪便(供体A:女性,27岁;B:女性,24岁;C:男性,21岁;D:男性,32岁;E:男性,24岁)作为供体。在结肠培养开始时,将试验样品(0mg或1594mg)加入到无糖的基础培养基中,得到的最终浓度分别为0g/L(空白对照)或2.66g/L(Slim);之后通过将新鲜采集的粪便样本与厌氧磷酸盐缓冲液以1:5(m:v)的比例混合,为不同的人类志愿者制备粪便接种液,然后均质化10分钟并通过离心去除大颗粒(2分钟,500克)后,将粪便接种物(1:10)分别加入到培养基中,培养时间为48小时,温度为37℃,持续摇晃(90rpm),所有实验均重复三次。

2)人类肠道微生物生态系统模拟器(SHIME®)SHIME由五个反应器组成,这些反应器模拟了人体胃肠道的不同部分:胃,小肠和三个结肠区域。在接种健康人类志愿者(男性,32岁)的粪便微生物群后,结肠隔室模拟升结肠(AC),横结肠(TC)和降结肠(DC)。SHIME运行的实验设置包括两个星期的启动期,两个星期的对照期和三个星期的干预期,在干预期间,每天将1594 mg/d剂量的试验样品与食物一起服用。

检测指标:短期结肠培养,在结肠培养0h和48h后进行pH、气体、SCFA和乳酸(LA)测量;SHIME实验期间,每周收集三次微生物代谢活动的样本,并对微生物群落进行分析,同时检测上皮细胞和巨噬细胞共培养模型中对宿主细胞的影响。  

试验结果

1)供体选择

由表1可知,5个供体产生的气体、乳酸和SCFA(其中包括乙酸盐、丙酸盐和丁酸盐)含量增加,pH值和支链SCFA降低;此外,由于在不同的供体中测试产品发酵后观察到的趋势相似,因此选择了具有高代谢活性的供体D作为长期的SHIME实验。

2微生物代谢活性分析

由图1可知,试验样品干预后AC、TC和DC的碱消耗量增加,分别为7.44(±3.19)、4.86(±4.17)和1.98(±1.38)mL/day;试验样品导致所有结肠区域的乙酸产生增加,其中对升结肠的影响具有统计学意义(P<0.01),即增加2.7mM(+13%);此外,丙酸在三个结肠区域都有增加(p < 0.001),即在AC、TC和DC中分别增加了2.1mM(+19%)、3.4mM(+24%)和4.1mM(+30%);AC和TC中的丁酸盐产量显著增加(P<0.01),其中AC中的丁酸盐影响最为显著(+7mM(+84%))。

由图2可知,试验样品的干预对整个模拟结肠中的乳酸产生有轻微影响。在AC(+0.35 mM)中观察到显著的乳酸积累,而在TC和DC中乳酸水平保持不变。

3)微生物群落组成分析

由表2可知,为了评估试验样品对相关分类群(双歧杆菌、乳酸菌、嗜粘蛋白-阿克曼菌、拟杆菌和厚壁菌门)的影响,对腔内微生物群进行了qPCR分析。在干预期间,AC和TC的腔内环境中的嗜粘蛋白-阿克曼菌含量增加(AC中从定量限以下到7.15 log/mL,TC中平均为+0.5 log/mL);干预的第二周和第三周,在AC中其水平升高,而在干预的第一周,TC中观察到直接的干预效果(+0.75 log(或+ 8%))。

试验样品干预后,在AC的腔内环境中,厚壁菌门和拟杆菌门大幅增加,特别是在干预的第二周和第三周(两个门至少+1.5 log/mL(+15%);腔内厚壁菌门和拟杆菌门水平在TC和DC中不受影响。

经过适应期后,在干预的第二和第三周,乳酸菌和双歧杆菌在AC的腔内受到刺激(两个菌属都超过了+2.5 log/mL(>30%));在TC中也观察到乳酸菌属的腔内增加,但没有AC中那么明显(+0.4 log/mL)。如图3所示,腔内乳酸菌群落主要由与三个不同物种有关的操作分类单位(OTU)主导,即植物乳杆菌、Lactobacillus oris和Lactobacillus antri;在干预期间,植物乳杆菌在三个结肠区域的相对丰度趋向于增加到19-33%

4)对上皮细胞和巨噬细胞共培养模型中宿主细胞的影响

如图4a所示,通过测量Caco-2细胞的TEER作为肠道屏障功能的量度,所有的产品都能保持TEER值接近100%;采用试验样品干预后,TC的TEER趋于增加(+9.7%),DC的TEER也有显著的增加(+18.5%)。此外,如图4h所示,与各自的对照组相比,在TC和DC中的干预期之后,LPS诱导的THP1巨噬细胞的NF-κB转录活性更加明显。如图4b-4g所示,在细胞因子水平方面,TC和DC中干预期后LPS诱导的IL-10和IL-6显著增加(即IL6,TC+2.5倍,在DC中+3.2倍;IL10,在TC中+2.3倍,在DC中+2.7倍);与相应的对照组相比,试验样品干预可诱导较少的IL-1β(在TC和DC中)和较多的IL-8(仅在TC中显著),并增加DC中的CXCL10水平;然而相比于对照产品,TNF-α在AC中观察到减少,而在TC和DC中观察到增加。

试验结论

采用经验证的体外肠道模型(即SHIME®模型),结合上皮细胞和巨噬细胞的共培养,研究长期服用低聚木糖/多酚混合物的益生元潜力和免疫调节作用,结果发现该混合物沿整个结肠良好发酵,导致升结肠中丁酸盐(+7 mmol/L)的产生增加;横结肠中乙酸盐、丙酸盐和丁酸盐的产生增加(每种大约+4 mmol/L);降结肠中丙酸盐的产生也增加(+4.1 mmol/L);升结肠中铵减少和乳酸水平升高,这与乳酸杆菌和双歧杆菌的增加相关(+2.5 Log/mL)。此外,近端结肠管腔中产丙酸的嗜粘蛋白-阿克曼菌增加(高达7.15log/mL);同时观察到对远端结肠的Caco-2屏障功能有保护作用,并有明显的免疫激活特性 。


 

考资料:

Van, den, Abbeele, et al. A combination of xylooligosaccharides and a polyphenol blend affect microbial composition and activity in the distal colon exerting immunomodulating properties on human cells[J]. Journal of Functional Foods, 2018.